Preparasion e recuisiti del reagente de l’adrenomedullina de połastro (ADM)

1. Siero: coagulasion a tenperadura anbiente par 10-20 min, centrifugasion par 20 min a vełocità de 2000-3000 r.pm. Rancurar el soranadante co atension e centrifugar de novo se ghe xe precipitasion durante ła conservasión.

2. Plasma: l’EDTA o el citrato de sodio i ga da esar sełesionài come anticoagulante in base ai recuisiti del canpion. Dopo vér misià par 10-20 minuti, centrifugà par 20 minuti a ła vełosità de 2000-3000 giri al minuto. Rancurar el soranadante co atension e centrifugar de novo se se forma precipitasion durante ła conservasion.

3. Urina: raccogliere con tubo sterile, centrifugare per 20 minuti alla velocità di 2000-3000 r.pm. Rancurar el soranadante co atension e centrifugar de novo se se forma precipitasion durante ła conservasion. Implementasion de riferimento del liquido toracico e addominałe, liquido cerebrospinałe.

4. Sopranatante de cultura cełułare: rancurar co un tubo sterile quando se cata i conponenti esudatori. Centrifugar par 20 minuti a vełosità de 2000-3000 r.m. Rancurar el soranadante co atension. Co se catava i conponenti inte łe cełułe, ła sospension cełułare ła xe stà diluìa co PBS (pH 7,2-7,4), e ła consentrasion cełułare ła xe rivà a 1 milion/mL. Co ła congełasion e el scongelamento, łe cełułe łe vien distrute e i conponenti intracełułari i vien libarài. Centrifugar par 20 minuti a vełosità de 2000-3000 r.m. Rancurar el soranadante co atension. Se durante la conservazione si forma precipitazioni, centrifugare ancora.

5. Canpion de tesuto: dopo vér tajà el canpion, pesalo. Xonta na serta quantità de PBS, PH7.4. Crioconservasion rapida in azoto liquido pa un uxo dopo. El canpion el resta a na tenperadura de 2-8 gradi dopo ła fuxion. Xe stà zontà na serta quantità de PBS (PH7.4), e el canpion xe stà conpletamente omojeneixà a man o co un omojeneixador. Centrifugar par 20 minuti a vełosità de 2000-3000 r.m. Rancurar el soranadante co atension. Divide uno pa ła prova e congeła el resto pa ła riserva.

6. I canpioni i ga da esar estrati el prima posibiłe dopo ła rancura. L’estrasion ła ga da esar fata secondo ła leteratura rełativa, e i esperimenti i ga da esar fati el prima posibiłe dopo l’estrasion. Se el test no pol esar fato suito, el canpion el pol esar tegnùo a -20 gradi, ma no se ga da congełar e scongelarlo ripetui.

7. No se pol catar el canpion che contien NaN3, parché NaN3 el bloca l’atività de HRP.